摘要：目的 研究衣被蛋白复合物亚基β-2 (coatomer protein complex subunit β2,COPB2)的表达对膀胱癌发病的影响,探讨COPB2在膀胱癌中的分子作用机制。方法 从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库下载膀胱癌中COPB2的相关数据,探究COPB2的表达水平与预后关系。根据膀胱癌不同分期将样本进行分组。使用Kaplan-Meier法对不同组别间的生存情况进行分析。使用COPB2-shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染5637细胞(人膀胱癌细胞),RT-qPCR和蛋白印迹检测细胞中COPB2表达变化。使用平板克隆实验评估细胞的增殖能力。对细胞中p27 kip1、半胱天冬酶-3和多腺苷二磷酸多聚酶的表达水平进行蛋白印迹检测。检测细胞中与上皮-间充质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关的N-钙黏蛋白和Snail的表达水平。结果 肿瘤免疫浸润评分数据库(tumor immune estimation resource,TIMER)显示,相比于正常膀胱,COPB2在膀胱癌中过表达。COPB2表达水平越高,患者预后越差(P<0.05)。COPB2敲低后膀胱癌细胞增殖能力减弱,凋亡相关蛋白表达增加,EMT相关蛋白表达减弱。结论 COPB2在膀胱癌中的高表达显著促进膀胱癌发生发展,是一种有前途的膀胱癌治疗靶点。

暂无相关信息！

[1]ZHANG Y,RUMGAY H,LI M,et al.The global landscape of bladder cancer incidence and mortality in 2020 and projections to 2040 [J].J Glob Health,2023,13:04109.

[2]XIA C,DONG X,LI H,et al.Cancer statistics in China and United States,2022:profiles,trends,and determinants [J]. Chin Med J (Engl),2022,135(5):584-590.

[3]RITCH CR,VELASQUEZ MC,KWON D,et al.Useand validation of the AUA/SUO risk grouping for nonmuscleinvasive bladder cancer in a contemporary cohort [J].J Urol. 2020,203(3):505-511.

[4]ALFRED WITJES J,LEBRET T,COMPÉRAT EM,et al.Updated 2016 EAU guidelines on muscle-invasiveand metastatic bladder cancer [J].Eur Urol,2017,71(3): 462-475.

[5]张力峰，苏泉心，鹿超，等.改良腹腔镜下全膀胱切除术治疗女性高级别膀胱癌的安全性和有效性[J].手术电子杂志，2022, 9(2):39-43.

[6]张力峰，张力，鹿超，等.腹腔镜全膀胱切除术后输尿管皮肤造口与原位新膀胱两种术式临床疗效分析[J].手术电子杂志， 2022,9(3):31-36.

[7]POSTE G.Bring on the biomarkers [J].Nature,2011, 469(7329):156-157.

[8]WU B,WU Y,GUO X,et al.An integrative pan-cancer analysis of the oncogenic role of copb2 in human tumors [J]. Biomed Res Int,2021,12:7405322.

[9]FENG Y,LEI X,ZHANG L,et al.COPB2:a transport protein with multifaceted roles in cancer development and progression [J].Clin Transl Oncol,2021,23(11):2195-2205.

[10]PUX,WANG J,LIW,et al.COPB2 promotes cell proliferation and tumorigenesis through up-regulating YAPlexpression in lung adenocarcinoma cells [J].Biomed Pharmacother,2018, 103:373-380.

[11]WANG X,SHI J,NIU Z,et al.MiR-216a-3p regu-latesthe proliferation,apoptosis,migration,and invasion oflungcancer cells via targeting COPB2 [J].Biosci BiotechnolBiochem,2020,84(10):2014-2027.

[12]COMPÉRAT E,AMIN MB,CATHOMAS R,et al.Current best practice for bladder cancer:a narrative reviewof diagnostics and treatments [J].Lancet,2022,400(10364):

1712-1721.

[13] GAO Y,CAO H,HUANG D,et al.RNA-Binding proteinsin bladder cancer [J].Cancers(Basel),2023,15(4):1150.

[14]DE BAERE E,SPELEMAN F,VAN ROY N,et al.Assignment of the cellular retinol-binding protein 1 gene (RBP1)and of the coatomer beta subunit gene(COPB2)to humanchromosome band 3q23 by in situ hybridization [J].CytogenetCell Genet,1998,82(3-4):226-227.

[15]BECK R,RAWET M,WIELAND FT,et al.TheCOPI system:molecular mechanisms and function [J].FEBS Lett,2009,583(17):2701-2709.

[16]ZHANG J,WANG X,LI G,et al.COPB2:A novelprognostic biomarker that affects progression of HCC [J]Biomed Res Int,2021:6648078.

[17]BHANDARI A,ZHENG C,SINDAN N,et al.COPB2is up-regulated in breast cancer and plays a vital role inthe metastasis via N-cadherin and vimentin [J].J Cell Mol Med,2019,23(8):5235-5245.

[18]FENG Y,SUN C,ZHANG L,et al.Upregulation of COPB2 promotes prostate cancer proliferation and invasion through the MAPK/TGF-β signaling pathway [J].Front Oncol,2022,12:865317.

石泽玢,李寿春,左立,等.衣被蛋白复合物亚基β-2在膀胱癌中的分子机制研究[J].泌尿外科杂志(电子版),2024,16(02):18-24.DOI:10.20020/j.CNKI.1674-7410.2024.02.03.

暂无相关信息！

膀胱癌是一种在全球范围内普遍存在的泌尿系统恶性肿瘤。尽管治疗方法不断改进，但该疾病的发病和死亡人数仍然十分惊人。据2020年数据统计，全球新发膀胱癌病例约为573000例，死亡病例约为213000例。男性发病率和死亡率(分别为9.5/100000和3.3/100000)比女性(分别为2.4/100000和0.9/100000)高约4倍^[1]。根据中国公布的报告，2020年膀胱癌发病率为91893例，死亡率为42973例^[2]。膀胱癌早期并无明显的临床症状，也没有确定的肿瘤标志物协助诊断膀胱癌，以至于其发现时多为晚期。膀胱癌包括从低风险非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC)到高风险原发性浸润性膀胱癌。低、中危NMIBC患者5年无事件生存率分别达43%和33%^[3]。然而，对于肌层浸润性膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)患者，其转移率高达50%～70%,并且鉴于其转移率极高，晚期MIBC患者5年总生存率为4.8%^[4]。膀胱癌主要以手术治疗为主，同时结合其他治疗方式进行综合治疗，但是术后高复发率以及远处转移常导致患者预后不佳^[5-6]。随着对膀胱癌细胞层面疾病机理的深入研究，靶向治疗成为晚期膀胱癌患者的新选择。生物标志物改善治疗和降低医疗成本的能力可能比当前医学研究的任何其他领域都要大，寻找膀胱癌相关生物标志物可以引导研究者寻找新的治疗靶点，从而开发更有效的治疗方法^[7]。Coatomer蛋白复合物是一种存在于细胞内的复合体，参与调控细胞内蛋白质的运输和分泌。衣被蛋白复合物亚基β-2(coatomer protein complex subunit β2,COPB2)是Coatomer蛋白复合物的一个亚基，其在高尔基体和内质网间的转运过程中发挥重要作用^[8]。COPB2在维持细胞器的完整性及维持细胞内环境平衡方面也发挥着重要作用^[9]。越来越多的研究表明COPB2在肿瘤增殖、存活、侵袭和转移中起重要作用，在大多数肿瘤中起到促进肿瘤发展的作用，并可能成为癌症预后的潜在标志物^[8-9]。例如，COPB2能够通过促使肺癌细胞中的yes关联蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)进入细胞核，从而促进体外细胞增殖和体内肿瘤发生^[10-11]。鉴于COPB2在多种肿瘤发生和进展中的重要作用，本文旨在研究COPB2在膀胱癌中的分子机制，研究COPB2在膀胱癌中的表达水平，并探讨其与预后的关系及在细胞增殖、凋亡与侵袭中所起到的作用。本研究经本院医学伦理委员会审核批准(批准号：[2020]KY223-1001)。

1 资料与方法

• 1.1 实验主要试剂

• 1.2 研究方法

• 1.2.1 生物信息学分析

• 1.2.2 细胞培养

• 1.2.3 慢病毒介导shRNA转染5637细胞

• 1.2.4  COPB2 基因

• 1.2.5 CCK8 实验

• 1.2.6 细胞集落形成测定

• 1.2.7 细胞周期、凋亡、EMT 相关蛋白检测

• 1.3 统计学处理

2 结果

• 2.1 COPB2在膀胱癌中的表达及预后分析

• 2.2 富集分析

• 2.3 COPB2在5637细胞中的mRNA 检测

• 2.4 COPB2基因沉默抑制5637细胞增殖

• 2.5 COPB2基因沉默对细胞周期、凋亡及EMT的影响

3 讨论

膀胱癌作为全球性疾病，其发病率在泌尿系统恶性肿瘤中位列第二^[12]。尽管膀胱癌的诊断和治疗取得重要进展，但其仍然是容易复发且危及生命的肿瘤之一^[13]。若不积极治疗，其快速生长和转移的倾向性很高。在过去的研究中，已验证多种分子标记物，但没有一种显示出对尿路上皮肿癌诊断有益或具有独立诊断价值^[12]。因此，迫切需要鉴定更多治疗靶点，以更精确地预测治疗效果为患者提供更好的治疗选择。COPB2是由位于染色体3q23上的基因编码生成的，是形成外壳蛋白复合物I (coatpro-teincomplex,COPI)的7个亚基之一，参与高尔基体和内质网之间的转运^[14-15]。COPB2不仅参与囊泡的转运，还作为致癌基因参与肿瘤细胞发育。例如，具有高COPB2表达的肝细胞癌患者比具有低COPB2表达的患者预后更差；在乳腺癌中，COPB2可以起到预测转移的作用；在前列腺癌中，上调COPB2可以通过MAPK/TGF-β信号通路从而促进前列腺癌的增殖^[16-18]。这些结果表明COPB2在肿瘤的发生发展中非常重要，故本研究推测COPB2在膀胱癌的发展中也同样重要。本研究利用生物信息学分析出COPB2与膀胱癌相关，后进行一系列体外机制研究实验进行验证。首先在TIMER中观察肿瘤样品和正常组织的COPB2表达谱，结果发现COPB2在膀胱癌中呈高表达。基于TCGA数据库生物信息分析显示，膀胱癌组织中COPB2 mRNA水平高于非肿瘤组织。GSEA结果显示，COPB2通过多种信号通路影响膀胱癌的进展。研究发现高COPB2表达的患者具有更差的预后。为深入探究COPB2在膀胱癌中的功能机制，使用COPB2-shRNA慢病毒载体转染5637细胞，结果显示在敲低COPB2后膀胱癌细胞的增殖能力与对照组相比受到显著抑制，并且与凋亡相关的蛋白得到激活。以上证据表明，COPB2可作为膀胱癌新的生物标志物且有望成为膀胱癌的治疗靶点。但是本研究还存在一定的局限性，碍于实验条件及技术的限制，只验证了COPB2在膀胱癌中的作用，并没有深入研究其影响的通路和蛋白表达，需要进一步的体内实验来验证实验结果。

暂无相关信息！

暂无相关信息！