摘要：目的 明确免疫相关基因的表达与早期肾透明细胞癌预后之间的关系，建立早期肾透明细胞癌免疫相关 基因的预后模型，并评估该模型与肿瘤浸润免疫细胞之间的关系。方法 下载 TCGA公共数据中早期肾透明细 胞癌的 RNAseq数据及相应的临床信息，收集 2018年 1月至 3月于北京协和医院泌尿外科经病理确诊为早期肾透 明细胞癌的肿瘤组织及癌旁正常组织 27对，采用液相色谱-质谱定量检测组织中的免疫相关蛋白的表达水平。根 据相应的阈值，同时存在 RNA 和蛋白水平差异性表达的基因视为差异分子，构建基于差异免疫分子的预后模 型，并计算每个样本的风险得分，使用TIMER在线网站计算肿瘤浸润免疫细胞的分布，利用Spearman相关性分 析，评估肿瘤免疫基因的风险得分与肿瘤浸润免疫细胞之间的关系。结果 本研究共筛选出 261例 TCGA早期 肾透明细胞癌患者的RNAseq数据及相应的临床预后信息，同时收集了27对组织样本。通过差异性分析，最终确 定了 ARG2、HRG 等 15 个差异性表达分子。COX 线性回归模型建立了由 FCGR3A、ZAP70、C3、VAV1、 ANGPTL4所构成的预后模型，且高风险组的预后显著差于低风险组，差异有统计学意义 （P=0.0024）。多因素 分析提示，由该模型所确定的风险分层是患者的独立预后因素 （HR=1.7，P=0.021）。相关性分析提示，肿瘤的 风险得分与树突状肿瘤浸润免疫细胞具有相关性，差异有统计学意义 （P<0.01）。结论 由5个免疫基因所构成 的早期肾透明细胞癌预后模型可以准确地预测患者的预后，且与肿瘤微环境中的树突状细胞具有相关性。

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王站,张铭鑫,郑国洋,等. 早期肾透明细胞癌免疫基因相关预后模型的建立[J]. 泌尿外科杂志（电子版）,2021,13(3):16-24. DOI:10.3969/j.issn.1674-7410.2021.03.006.

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肾癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，仅次 于前列腺癌和膀胱癌[1] 。最新研究表明，2021年全美 约有 76 080例新发肾癌患者，男性约 48 780例，女 性约 27 300 例，分别占全身恶性肿瘤的 5%、3%[1] 。 肾癌的早期预后较好，局限期及局部进展期肾癌的 5年生存率分别在 90%、70%，而一旦发生远处转移， 其 5年生存率则迅速降低至 10%左右[1] 。肾透明细胞 癌是肾癌最常见的病理类型，约占所有病理类型的 60%~80%[2] 。

肾癌的治疗由最初的细胞因子治疗发展到血 管内皮生长因子受体的靶向治疗，患者的总生存期 及无病生存期得到延长，且生活质量也得到了明显 改善[3] 。近年来，免疫联合治疗为肾癌的治疗提供了 新的思路。由于肾癌组织内往往含有大量如 T 淋巴 细胞在内的多种肿瘤浸润免疫细胞，因此被认为是 免疫原性肿瘤[4] ，提示癌组织内的免疫状态可能会影 响患者的预后，且可能存在新的免疫靶点。

目前对于肾癌的预后评估，最常用的方法是 TNM 分期系统。而对早期肾癌来说，单纯的 TNM 分期并不能很好地评估预后情况。因此，本研究联 合了 TCGA 的转录本测序和液相色谱-质谱所检测 到的蛋白组学数据，构建了早期肾癌的免疫基因诊 断模型，并评估了该模型和肿瘤浸润免疫细胞之间 的关系，以期为肾癌相关的免疫研究提供新的思路。

1 资料与方法
    1.1 组织样本的来源、采集及数据处理
    1.2 TCGA数据的收集及处理
    1.3 差异性免疫相关基因的确定
    1.4 免疫相关基因预后模型的建立
    1.5 多因素 COX 回归分析及列线图的建立
    1.6 免疫相关预后模型和肿瘤浸润免疫细胞之间的相关性分析

2 结果
    2.1 基线资料
    2.2 差异性免疫相关基因的确定
    2.3 免疫相关基因预后模型的建立
    2.4 早期肾透明细胞癌预后的多因素回归分析及列 线图的建立
    2.5 免疫相关预后模型和早期肾透明细胞癌免疫浸润细胞之间的关系

3 讨论

3 讨论 

近年来，随着免疫检查点抑制剂的临床应用， 对肿瘤免疫状态以及肿瘤微环境的研究逐渐深入。 肿瘤微环境是肿瘤细胞周围的非癌细胞和分子，包 括免疫细胞、血管、脂肪细胞、间充质干细胞、肿 瘤相关成纤维细胞和细胞外基质。有研究显示，肾 透明细胞癌组织中存在包括 CD8+ T 淋巴细胞在内的 多种免疫细胞，肾透明细胞癌免疫基因以及肿瘤浸 润免疫细胞的预后模型也在不断完善。但很少有研 究关注免疫基因在早期肾透明细胞癌预后中的作用。

在本项研究中，通过对 261 例 TCGA 数据库 RNAseq，以及利用液相色谱-质谱仪检测 27对早期 肾透明细胞癌蛋白组学数据的分析，确定了 15个差 异性表达的免疫分子。其中，有 11个和患者预后密 切相关。功能富集分析提示，这些分子主要参与免 疫调节，自然杀伤细胞 （natural killer cell，NK 细 胞） 介导的细胞毒性作用等免疫调节过程。COX 回 归分析建立了由 FCGR3A、ZAP70、C3、VAV1、 ANGPTL4 免疫分子组成的预后模型，该模型不仅 是早期肾透明细胞癌患者的独立预后因素，还能够 较为准确地预测患者的生存率。此外，该模型还与 患者的年龄以及生存状态相关。为了评估免疫得分与 肿瘤免疫微环境之间的关系，本研究进行了6种免疫细 胞和免疫得分之间的相关性分析，结果显示，免疫状态和肿瘤微环境中的树突状细胞具有相关性。 补体 C3 不仅与早期肾透明细胞癌的预后相关， 还参与预后模型的构建。补体系统作为先天免疫反 应的一个组成部分，可以通过调节巨噬细胞和淋巴 细胞的功能，直接或间接地影响肿瘤的发生、发展 和转移[9] 。越来越多的研究表明，多种肿瘤微环境中 补体的免疫调节功能被过度激活，如结肠癌、肺 癌、神经母细胞瘤、慢性淋巴细胞白血病、卵巢癌 和胃肠道肿瘤[10-11] 。胃癌组织中补体 C3 表达水平的 升高预示患者预后不良，且离体实验证明 C3能够上 调 JAK2/STAT3 的信号通路而促进胃癌的进展[11] 。 此外，肝星状细胞能够在体外通过 C3途径促进 T 细 胞凋亡和增殖，抑制树突状细胞成熟，并诱导骨髓 源性抑制细胞增殖，在肝癌的免疫微环境调节中发 挥重要作用[12] 。此外，另有包括补体 C3基因在内的 11 种补体基因的过表达与肾透明细胞癌的预后相 关，在程序性死亡受体 1耐药的肾透明细胞癌小鼠模 型中，补体缺陷以及补体受体的阻断均能够通过增 强抗肿瘤免疫，减少血管生成来抑制肿瘤生长[13] 。本 研究发现，早期肾癌组织中补体 C3无论是在转录水 平还是蛋白水平均明显升高，且与患者的不良预后高度相关，这些均提示补体 C3可能在调节肾透明细 胞癌肿瘤微环境中发挥一定的作用，且有可能成为 免疫治疗新的靶点。 

VAV1是 VAV 家族蛋白的一员，VAV 家族蛋 白由 VAV1、VAV2和 VAV3组成。VAV1能够促 进二磷酸鸟苷向三磷酸鸟苷进行转换[14] 。VAV1对于 未成熟 T 细胞的发育、选择以及成熟 T 细胞参与抗 原反应至关重要。研究显示，VAV1 基因敲除小鼠 的淋巴细胞减少，且 T 细胞相关免疫反应存在缺 陷[15] 。在乳腺癌中，VAV1普遍定位于细胞核内，这 与低复发率呈正相关；VAV1 还能够通过影响乳腺 癌侵袭和转移相关基因的表达，负性调节体外侵袭 性和体内转移效率[16] 。此外，VAV1过表达还能抑制 Akt2 的表达，抑制胰腺癌细胞系的增殖和迁移[17] ， VAV1过表达的 NK细胞还能够增加其对肿瘤细胞的 杀伤力[18] 。本研究中，VAV1作为早期肾透明细胞癌 的保护因子而被纳入到预后模型中。VAV1 的高表达，能够降低早期肾透明细胞癌患者死亡的风险， 提示 VAV1可能在肿瘤浸润免疫细胞功能调节方面 发挥作用。 

本研究具有一定的局限性。第一，本研究的样 本量较少。共入组 288 例早期肾透明细胞癌组织样 本，对于高通量组学的研究来说，样本量仍较小。 第二，由于本研究中检测的早期肾透明细胞癌患者 的预后均较好，未见复发及转移，因此后续的生存 分析等，均是以 TCGA 数据库为基础，缺乏了蛋白 组学的验证，日后会将继续随访患者的预后，以获 得更加完整的数据。 

综上所述，建立的 5个免疫基因所组成的早期肾 透明细胞癌预后模型能够很好地预测患者的预后， 且与肿瘤浸润树突状细胞关系密切。

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