摘要：目的 探讨miRNA-660在膀胱癌中的表达情况及对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。方法 收集 2016年 8月至 2017年 12月中南大学湘雅医院泌尿外科 55例膀胱癌患者的手术标本，采用 qRT-PCR方法检测 miRNA- 660在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达，体外细胞基培养 5637、EJ-M3细胞株，并分别对其细胞株行 miRNA- 660的敲除和过表达；CCK-8/EDU、Transwell侵袭实验检测目的基因敲除或过表达后对 EJ-M3、5637细胞增殖、侵袭能力的影响。结果 miRNA-660在膀胱肿瘤组织中低表达，正常癌旁组织呈高表达 （P<0.05）。敲除 miRNA-660、5637细胞株增殖和迁移能力增强，过表达miRNA-660、EJ-M3细胞株细胞增殖和迁移能力明显 降低。结论 miRNA-660可能抑制膀胱癌细胞的生物学行为，与膀胱癌的发生、发展相关。

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膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，其发 病率呈逐年上升趋势。有学者统计发现，近年膀胱 癌患者的发病开始倾向低龄化[1,2] ，且男性发病率是 女性的 3~4倍[3] 。由此可见，膀胱癌已然成为危害人 体健康，降低患者生活质量的高危疾病。膀胱癌的 临床表现主要以间断全程肉眼血尿为主，也有因尿 频、尿急、尿痛症状就诊而确诊的患者，少部分患 者在体检中发现膀胱占位[4] 。目前膀胱癌的治疗方 法有：非肌层浸润性膀胱癌 （non muscle invasive bladder cancer, NMIBC） 多采用经尿道膀胱肿瘤电切术加术后化疗药物灌注治疗，而针对肌层浸润性 膀 胱 癌 （muscle invasive bladder cancer, MIBC） 可采用腹腔镜下膀胱部分切除或根治性切除术。无 论手术切缘阳性与否，膀胱癌均具有易向周围组织 侵犯和远处转移的特性[5] ，从而导致膀胱癌术后复 发，这也是临床工作者一直想要攻克的难题。目前 许多研究发现，膀胱癌的发生、发展、转移可能与 miRNA 存在一定相关性[6] 。基于此，本研究开展了 miRNA-660在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞 株生物学行为的研究，以期揭示 miRNA-660在膀胱 癌中的作用。

1 材料与方法
    1.1 组织标本
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞株
        1.2.2 主要试剂
        1.2.3 细胞培养和转染
        1.2.4 qRT-PCR 检测
        1.2.5 细胞增殖实验
    1.3 统计学方法

2 结果
    2.1 组织样本 miRNA-660的表达
    2.2 miRNA-660 的敲除和过表达效率
    2.3 CCK8/EDU、Transwell方法检测敲除miRNA- 660后对膀胱癌细胞株5637增殖功能的影响
    2.4 CCK8/EDU、Transwell方法检测过表达miRNA- 660后对膀胱癌细胞株EJ-M3增殖功能的影响

3 讨论

3 讨论 

在我国，膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿 瘤，其病情的发生、发展是遗传和环境共同作用的 结果。目前，膀胱癌的治疗手段有经尿道膀胱肿瘤 电切术、膀胱部分/全切除术及新辅助治疗后腹腔镜 下膀胱全切除术。虽手术可以达到肿瘤切缘阴性， 但据流行病学调查，出现区域或远处转移的膀胱癌 患者的 5年生存率也只有 4.5%~6%[7] 。因此，对膀胱 癌的早期诊断、早期干预是提高患者疾病预后和生 活质量的非常重要的手段。同时，认识膀胱癌与机 体内在分子的关系和功能亦同等关键[8,9] 。随着研究 者对膀胱癌认识的加深，一些学者逐渐开始研究肿 瘤分子发生机制，伴随肿瘤分子标志物检测技术、 芯片技术及精准分子医学的兴起，为肿瘤的分子研 究打下了坚实基础。

miRNA是一类长约21~24个核苷酸的单链RNA， 广泛存在于真核细胞中，miRNA 在基因水平调控中 扮演了重要的角色[10] 。不少研究发现，同一种miRNA 可以靶向不同的下游基因，且在多种实体瘤中发挥 作用[11] 。miRNA 的生物学功能也开始逐渐被挖掘， 研究表明，成熟的miRNA不仅可以调控下游miRNA， 改变组织蛋白的表达，也可以影响药物在机体内的 代谢[12,13] 。ZHANG 等[14] 实验得出，在骨肉瘤组织和 骨肉瘤细胞系中 miRNA-660 表达显著上调，敲除 miRNA-660可以导致骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力 显著降低，提示 miRNA-660可能在骨肉瘤的发生发 展中起促进作用。HE 等[15] 通过在肾癌细胞株中的实 验提示上调 miRNA-660可以抑制肾癌细胞株的生物 学行为，反之下调 miRNA-660 会导致癌细胞株增 殖/侵袭能力增强。SHEN 等[16] 也通过对 miRNA- 660的敲除与过表达实验，得出抑制 miRNA-660表 达，可能会抑制乳腺癌肿瘤的发展和转移。以上诸 多研究提示 miRNA 具有组织异质性、时序性等特 点，同一种 miRNA 在不同实体瘤中生物学作用可能 不同[17] 。

基于目前所报道的 miRNA-660 在肺癌、乳腺 癌、肾透明细胞癌中的研究，本研究是首次在膀胱 癌中对 miRNA-660进行验证，不仅做了 qRT-PCR 验证，得出 miRNA-660在正常组织中高表达，在癌 组织中低表达，而且在体外细胞学实验中，通过 CCK8/EDU 及 Transwell实验得出过表达 miRNA- 660 可以抑制膀胱癌细胞 EJ- M3 的增殖与侵袭能 力，敲除 miRNA-660 可以增强膀胱癌细胞 5637 增 殖/侵袭的生物学功能。当然，本研究只是初步验证 了 miRNA- 660 对膀胱癌细胞株增殖/侵袭能力影 响，后期可以更深入地研究其靶向的下游相关基 因，找到一条完整的作用机制通路，并开展相应的 动物体内成瘤实验来增加说服能力，后期继续纳入 更多的临床样本，跟进患者随访时间，进一步得出 该目的基因与患者预后、复发、生存时间上的关 系，以期对临床工作有一定的指导意义。

综上所述，miRNA-660 在膀胱癌组织中低表 达，在癌旁组织中高表达；敲除 miRNA-660后，可 以增强膀胱癌细胞株 5637的增殖、侵袭能力；过表 达 miRNA-660可以减弱 EJ-M3细胞株的增殖、侵袭能力。miRNA-660在膀胱癌的发生、发展中可能 起抑制作用，可能成为膀胱癌药物治疗的潜在分子 靶点，成为对膀胱癌诊断及其患者预后预测的新指 标，并为临床工作提供相关理论基础和循证依据。

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